Estandarización de una prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa Transcriptasa Reversa en tiempo real para Virus Chikungunya

Jemima Rojas Hurtado, Jonny Edward Duque Luna, José Ramos Castañeda, Ruth Aralí Martínez Vega

Resumen


Introducción: Desde la introducción en América de Virus Chikungunya (CHIKV) en el 2013, se ha convertido en un problema de salud pública en el mundo por la morbilidad y la carga económica que genera. El diagnóstico de laboratorio es una herramienta vital en la evaluación de la enfermedad y de las posibles complicaciones, así como en la vigilancia de la infección en el vector. Objetivo: Estandarizar una técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa Transcriptasa Reversa (RT-PCR) en tiempo real para la detección de CHIKV. Materiales y métodos: Se obtuvieron muestras sanguíneas de personas con fiebre y exantema residentes en el Área Metropolitana de Bucaramanga. Se hizo extracción de RNA viral con estuche de Qiagen. Se probaron tres técnicas reportadas en literatura, de RT-PCR en tiempo real SYBR Green One-Step, la de Ho que amplifica un fragmento del gen de la proteína nsP2 y las de Ummul y Agarwal del gen de la proteína E1. Se usó el equipo StepOnePlus de Applied Biosystem. Resultados: En una muestra se detectó CHIKV por las técnicas de Ummul (Ct 27,14) y de Agarwal (Ct 26,78). Ho mostró resultados inespecíficos (Ct 35,85 y 36,97). Conclusiones: Las técnicas que permitieron detectar CHIKV fueron Ummul y Agarwal, siendo congruente con los límites de detección reportados en la literatura (4,12 x 100 copias RNA/ml y 100 copias/25ml, respectivamente). Considerando lo reportado por Ho se asume que la cantidad de RNA viral presente en la muestra es menor al detectado por esta técnica (102 PFU/ml).

Palabras clave


RT-PCR tiempo real; SYBR Green; One-Step; CHIKV

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DOI: http://dx.doi.org/10.20320/rfcsudes.v4i2.s1.r04

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E-ISSN: 2422-1074