Frecuencia de genes de virulencia sfa/foc y fyuA en Escherichia coli aislada de adultos con infección del tracto urinario en Bucaramanga, Santander

Libeth Yajaira Criado Guerrero, Rolando Díaz Díaz, Edward Poso, Ana Elvira Farfán-García, Clara Isabel González, Ruth Aralí Martínez Vega

Resumen


Introducción: Aproximadamente, el 80% de los casos de las infecciones del tracto urinario (ITUs) son causadas por Escherichia coli uropatógenas (UPEC). La diversidad entre los patotipos de E. coli es debida a la presencia de genes específicos asociados a la virulencia. La patogénesis por E. coli en ITUs ha sido poco estudiada en nuestra región, por lo que identificar los genes de virulencia en cepas de E. coli permitirá ampliar el conocimiento de su patogénesis. Objetivo: Estandarizar la técnica de PCR para la identificación de los genes de virulencia sfa/foc y fyuA y describir su frecuencia en las cepas de E. coli aisladas. Materiales y métodos: Se incluyeron sujetos de 18 o más años, que consultaron de marzo a diciembre de 2015 a la E.S.E ISABU de Bucaramanga, Santander, con sintomatología urinaria a quienes se les confirmó infección por E. coli en urocultivo (>105 UFC/ml). Se excluyeron mujeres embarazadas, pacientes con urocultivos polimicrobianos, con diagnóstico de VIH o cáncer o con tratamiento inmunosupresor y pacientes con antecedente de uso de sonda vesical en los últimos siete días u hospitalizados en las últimas 72 horas antes del día del inicio de los síntomas. Los urocultivos se sembraron por el método del asa calibrada (0.01 ml) en agar sangre. Siembras adicionales se realizaron en agar Mc Conkey y en cromogénicos específicos. La identificación de E. coli se realizó en el equipo Phoenix 100 de BD y en el medio SIM. Finalmente, cada cepa se preservó a -80°C en caldo Luria con glicerol (15%) (DO550 1.8-2.0). La obtención del DNA bacteriano se realizó mediante el método de lisis por ebullición. Se realizó PCR Multiplex, para la amplificación del gen fyuA se utilizaron los iniciadores F (5’-CTCCGGAGAACTGGGTGCATCTTAC-3’) y R (5’-CGGAGGAGTAATTACAAACCTGGCA-3’), y para el gen sfa/focDE los iniciadores F (5’-CTCCGGAGAACTGGGTGCATCTTAC-3’), R (5’-CGGAGGAGTAATTACAAACCTGGCA-3’). La denaturación inicial fue a 94ºC por 2 min, seguido de 35 ciclos de 94ºC por 30 s, 59ºC por 30 s y 72ºC por 90 segundos. La extensión final fue a 65°C por 10 minutos. El amplificado correspondió a un fragmento de 787pb y 410pb, respectivamente. En el análisis para las variables categóricas se calcularon las frecuencias absolutas y relativas y para la edad se determinó el promedio y la desviación estándar (DE). Para las comparaciones se utilizaron la prueba exacta de Fisher y la t de Student, respectivamente. Resultados: Se estandarizó la técnica de PCR para la detección de los genes fyuA y sfa/foc. Durante el periodo se recolectaron 98 cepas de E. coli procedentes del mismo número de pacientes. El 85,7% de éstos fueron mujeres, con un promedio de edad de 59 años (DE 19.2). En el medio SIM, el 75,5% (n=74) de la cepas aisladas mostraron movilidad y el 77,6%  (n=76) produjeron gas. El 67,4% (n=66) presentaron el gen fyuA, mientras que solamente el 6,1% (n=6) tenían el gen sfa/foc. Todas las cepas que presentaron sfa/foc fueron positivas para fyuA (p=0.086). No hubo asociación entre la presencia de estos genes y la motilidad o la producción de gas (p>0.05), tampoco entre los genes y edad o sexo. Conclusiones: La frecuencia del gen fyuA es similar a lo reportado en Europa, pero la frecuencia del gen sfa/foc es menor a la reportada en Europa y Túnez. Este es el primer reporte de la frecuencia de estos genes de virulencia en Santander y en Colombia.


Palabras clave


Escherichia coli; uropatógeno; genes; PCR

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DOI: http://dx.doi.org/10.20320/rfcsudes.v3i1.s1.p018

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E-ISSN: 2422-1074